1、IGF-1試劑盒臨床意義

類(lèi)胰島素生長(cháng)因子-1（IGF-1）是一由70個(gè)氨基酸分子組成的多肽（分子量為7650道爾頓），它是胰島素循環(huán)過(guò)程中眾多相關(guān)類(lèi)胰島素生長(cháng)因子中的一種。此分子與前胰島素大約有50%的同源性，并且它有很多與胰島素相似的生物學(xué)功能。此多肽具有高度的生長(cháng)激素（GH）依賴(lài)性，但也越來(lái)越表現出GH非依賴(lài)性分泌。IGF-1有很多促進(jìn)生長(cháng)的功能，包括促進(jìn)細胞分裂和軟骨的硫酸化,它也可顯示出骨的更新速度。循環(huán)中的IGFP-1幾乎有95%以上都結合到特異性IGF結合蛋白（目前知道它有六個(gè)亞種）上。BP3是IGF-1的主要結合蛋白，它與IGF-1及一個(gè)酸性易變亞基一起形成一分子量為140000道爾頓的三元絡(luò )合物。

2、IGF-1試劑盒臨床應用

血清IGF-1的檢測在小孩生長(cháng)紊亂及支端肥大癥的診斷和治療檢測中具有重要意義。IGF-1的濃度會(huì )隨人的年齡、營(yíng)養狀態(tài)、身體結構和生長(cháng)激素的分泌而發(fā)生變化。IGF-1的檢測有利于身材矮小兒童的評價(jià)和惡性疾病病人的營(yíng)養學(xué)研究。在支端肥大癥的診斷中，IGF-1的檢測與隨機GH的檢測相比，前者更具有可靠性。

3、前言說(shuō)明

類(lèi)胰島素生長(cháng)因子1試劑盒為血清IGF-1的定量檢測提供了其所需材料。此檢測試劑盒僅供提外診斷用。

4、實(shí)驗原理

IGF-1 600ELISA試劑盒是一種固相的酶聯(lián)免疫實(shí)驗，采用爭競法的原理。實(shí)驗開(kāi)始前將病人樣品、標準品和質(zhì)控品先酸化和中和好。包被板的微孔中包被了單克隆抗體，這種單克隆抗體對IGF-1分子上的某單一抗原位點(diǎn)具有特異性。將預先處理好的樣品與酶聯(lián)物（生物素標記的IGF-1）在室溫下溫育。之后洗板，再加入酶復合物（辣根過(guò)氧酶標記的鏈親和素）并溫育。加入底物溶液后，溶液所顯示的顏色強度與病人樣品中IGF-1的濃度成反比。

5、實(shí)驗所需器材（但試劑盒不提供）

1. 酶標儀
2. 移液器
3. 吸水紙
4. 蒸餾水
5. 1.5ml的反應杯（用于樣品的準備）
6. 通用的指示紙

6、的儲存與穩定性

   未開(kāi)啟的試劑在2—8℃下貯存，在有效期內可以保持活性。不要使用過(guò)期試劑。開(kāi)封了的試劑必須儲存于2-8℃的環(huán)境下。微孔反應板也必須在2—8℃下貯存。一旦包裝袋被打開(kāi)，必須將它小心地嚴封起來(lái)。拆開(kāi)包裝后，包被的微孔反應板的免疫活性可在約6周內保持穩定，但必須密封在裝有干燥劑的袋子里。

7、樣本

血清可以用于此實(shí)驗，注意：據觀(guān)察，血漿中的IGF-1濃度明顯降低。切勿使用溶血、黃疸或脂血樣品。請注意：含疊氮鈉的樣品不能用于此實(shí)驗。

樣品的采集

血清：靜脈穿刺采集全血，待其凝血，室溫下離心獲取血清。在樣品未*凝結前請勿離心。接受了抗凝血治療病人的樣品可能需要更長(cháng)的凝血時(shí)間。

樣品的儲存：

樣品應當立即檢測。如果實(shí)驗前想要將樣品存放更長(cháng)的時(shí)間，則應將樣品凍存于-20℃的環(huán)境下。解凍的樣品在實(shí)驗前應反復倒置幾次。

樣品的稀釋?zhuān)?/span>

在*實(shí)驗時(shí)，如果血清樣品中IGF-1的濃度高于zui高標準品中IGF-1的濃度，則應將此樣品用零標準品稀釋?zhuān)磳?shí)驗步驟重新檢測。在計算濃度時(shí)應當將此稀釋因子考慮進(jìn)去。

例如：

• 按1：10的比例稀釋?zhuān)?0μl的血清+90μl零標準品（充分混合）
• 按1：100的比例稀釋?zhuān)?0μl已稀釋好的a）+90μl零標準品（充分混合）
•  

8、病人樣品和標準品的酸化與中和

1. 在1.5ml的反應Caps中加入200μl樣品、標準品和質(zhì)控孔。請注意：按照下列所述步驟，標準品既要進(jìn)行酸化，也要進(jìn)行中和。
2. 在加入20μl 1M的HCl
3. 混合并溫育15min
4. 向所有的Caps中加入20μl 1M的NaOH進(jìn)行中和，混合溶液。
5. 中和之后的pH值應該是7到8之間，請用通用指示紙檢測pH值。

9、類(lèi)胰島素生長(cháng)因子1試劑盒成分

1. 1M的HCl ，1支，3ml，即用，用于樣品的酸化。
2. 1M的NaOH，1支，3ml，即用，用于中和。
3. 包被板，12×8（可拆），96孔，包被孔中包被了抗IGF-1抗體（單抗）
4. 標準品（標準品0-6），7支，1ml，濃度：0；5；10；50；150；300；600ng/ml。NIBSC編號：87/518，轉換系數：1ng/ml×0.13=nmol/l。內含0.03%的Proclin300和0.005%的慶大霉素硫酸鹽做為防腐劑。
5. 酶聯(lián)物，1支，14ml，即用，生物素標記IGF-1，內含0.01%的甲基異噻唑酮，0.02%的BND防腐劑。
6. 酶復合物，1支，20ml，即用，HRP標記的鏈親和素復合物。
7. 底物液，1支，14ml，即用，TMB
8. 終止液，1支，14ml，即用，內含0.5M的H2SO4。避免接觸終止液，以免著(zhù)燒或刺激皮膚。
9. 洗滌液，1支，30ml（40倍濃縮）

注意：用于樣品稀釋的零標準品應視需要而定。